pUC-T 克隆试剂盒
产品名称: pUC-T 克隆试剂盒
英文名称: pUC-T Cloning Kit
产品编号: HS0506
产品价格: 0
产品产地: 北京厚生博泰生物技术有限公司
品牌商标: UPTECH
更新时间: null
使用范围: null
- 联系人 :
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- 邮箱 : hooseen@hsebio.com
pUC-T克隆试剂盒
pUC-T Cloning Kit
(目录号HS0506)
目录号 |
包装 |
价格 |
HS0506-1 |
20次 |
500元 |
HS0506-2 |
60次 |
1300元 |
产品包装
试剂盒成分 |
20次 |
pUC-T(50 ng/ul) |
20 ul |
T4 DNA Ligase (3U/ul) |
20 ul |
10 × Ligation Buffer |
30 ul |
2 × Ligation Buffer |
100 ul |
Control Insert(50 ng/ul) |
10 ul |
TOP10 Competent cell |
10 × 100 μl |
pUC19 (0.1 ng/ul) |
10 ul |
ddH2O |
1 ml |
自备试剂
克隆实验需自备IPTG、X-Gal和二甲基甲酰胺
保存条件
TOP10 Competent cell 于
产品简介
TA克隆是利用T载体3末端带有一个突出的T碱基, 而PCR扩增产物3端带有一个突出的A碱基的特点,在DNA连接酶的作用下,将PCR扩增产物克隆到T载体上,该方法是克隆PCR扩增产物的主要手段,可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率。本产品由pUC18载体改造而成,在pUC18载体的多克隆位点Xba I和Sal I位点之间插入EcoR V酶切位点,用EcoR V限制性内切酶进行酶切反应后,在两侧的3端添加 “T” 而成。专门用于TA克隆。
本试剂盒提供了两种连接Buffer: 10 × Ligation Buffer适合置于
产品特点
1. 在pUC18载体基础上构建而成,具有pUC18载体的相似功能。
2. 克隆效率高,阳性率在90%以上,缩短了筛选过程。
操作步骤
1. 将载体在冰上融化(尽可能避免反复冻融载体,在初次使用时最好分装成小份,每次使用时取出一小份),短暂离心,以免液体挂在管壁上。
2. 按以下体系配制反应液
成 分 |
2 × Ligation Buffer |
10 × Ligation Buffer |
||
反应体系 |
对照体系 |
反应体系 |
对照体系 |
|
pUC-T Vector |
1 ul |
1 ul |
1 ul |
1 ul |
目的PCR片段 |
X ul |
0 |
X ul |
0 |
Control insert |
0 |
1 ul |
0 |
1 ul |
2 × Ligation Buffer |
5 ul |
5 ul |
0 |
0 |
10 × Ligation Buffer |
0 |
0 |
1 ul |
1 ul |
T4 DNA ligase |
1 ul |
1 ul |
1 ul |
1 ul |
ddH2O |
补足到10 ul |
补足到10 ul |
补足到10 ul |
补足到10 ul |
(注意:本试剂盒提供两种连接缓冲液,切不可将两者加入到同一离心管中;载体与PCR片段的摩尔比控制在1:3 ~ 1:8范围内)
3. 轻弹离心管以混匀内容物,短暂离心,如选择10 × Ligation Buffer请将混合物置于22 ~
(注意:我们推荐使用10 × Ligation Buffer,
4. 将连接产物(10 ul)加入至 100 ul 感受态细胞中,冰浴30 min。
(注意:为节约成本,100 ul 感受态细胞可分成2等份使用,连接产物加5 ul 即可)
5.
6. 加入900 ul SOC或LB液体培养基(不含抗生素),
7. 取100 ~ 200 ul混合液在含有 X-Gal、IPTG和Amp的LB固体培养基上培养,形成单菌落。计数白色、蓝色菌落。
8. 挑选白色菌落,使用PCR法或酶切法鉴定插入片段是否正确。
注意事项
1. Insert DNA 要求
1) 连接使用的PCR 片段
2) PCR 产物建议进行切胶回收纯化后再进行T 载体克隆,以免PCR 产物中的非特异片段或残存引物等杂质影响。
2. 感受态要求
建议使用高效的热击转化感受态细胞,这样才可能得到比较理想的阳性克隆,如需进行蓝白筛选,宿主细胞必须具有正确的基因型(F´编码的【lacZ TUNEology 波长可调检测卡盒-->