平板克隆【实操干货】
平板克隆形成试验可检测贴壁细胞细胞的克隆形成能力,软琼脂集落形成试验可检测非锚着依赖生长的细胞,如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系等。
细胞转染
常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说,超螺旋质粒DNA转染效率较高,
哺乳动物稳定转染细胞系构建
最常用的真核表达基因载体的标志物有潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin)。筛选后可以得到稳定表达外源基因的细胞克隆,这就是稳定转染